Lichtabhängige Bakteriochlorophyllbiosynthese des marinen Bakteriums Dinoroseobacter shibae
Kontinuierliche Anpassungen an die sich ändernden Umweltbedingungen in seinem Lebensraum sind die Voraussetzung für ein erfolgreiches Überleben eines jeden Organismus. Gerade für die Mikroorganismen des Ozeans, die permanenten Änderungen ausgesetzt sind, ist dies notwendig. Das marine Bakterium Dinoroseobacter shibae hat in seiner Evolution zahlreiche Anpassungen an sein Habitat optimiert. Neben seiner metabolischen Diversität, kann D. shibae zusätzliche Energie aus Licht über die aerobe anoxygene Photosynthese generieren. Für die metabolische Analyse der Kontrolle dieser Art von Photosynthese, wurde im Rahmen dieser Arbeit zunächst ein Hochdurchsatzverfahren unter Nutzung einer Transposon-Mutantenbank erfolgreich etabliert. Die Transposonmutanten wurden hinsichtlich ihrer Pigmentierung, der spektrophotometrischen Absorption der Pigmente und der Akkumulation des Zwischenproduktes der Bakteriochlorophyllbiosynthese Magnesiumprotoporphyrin-IX-monomethylester untersucht. Neben klassischen Genen der Photosynthese, meist organisiert im Photosynthesegencluster, wurden Mutanten in Genen der zugehörigen Stressantwort, wie Lichtstress, Salzstress, ROS, der Energiegewinnung und zugehöriger Kontrolle gefunden. Weiterhin wurde analysiert, welche Lichtqualitäten und -quantitäten D. shibae nutzt. Es zeigte sich, dass blaues Licht einen positiven Effekt auf Wachstum und den lichtgesteuerten Elektronentransport hat. Dabei konnte gezeigt werden, dass die meisten Gene für den Photosyntheseapparat, die Bakteriochlorophyll- und die Carotinoidbiosynthese, sowie deren zugehörige Regulatoren und Stressproteine durch Blaulicht kontrolliert werden. Koreguliert werden Gene des Energiestoffwechsels und des Quorum sensing. Ebenso wurde die Regulation der Photosynthese durch Blaulicht untersucht. Dafür wurden die Transkriptome der Regulatoren PpsR und PpaA, sowie des potentiellen Blaulichtrezeptors Dshi_1135 und des Wildtyps untersucht. Das erlaubte nun eine detaillierte Einsicht, wie diese drei Regulatoren lichtabhängig, dabei kooperativ, die zuvor aufgelöste Lichtregulation der Genexpression steuern. Im letzten Teil dieser Arbeit wurde die Bakteriochlorophyllproduktion auf Einzelzellebene untersucht. Dabei zeigte sich die vesikuläre Organisation des Bakteriochlorophylls an der intrazellulären Membran. Zusammengefasst leistet diese Arbeit einen Beitrag zum fundamentalen Verständnis der durch Licht gesteuerten Prozesse und ihrer Regulation im marinen Modellbakterium D. shibae.
Continuous adaptation to the changing environmental conditions in its habitat is a prerequisite for the successful survival of any organism. This is especially necessary for the microorganisms of the ocean, which are exposed to permanent changes. The marine bacterium Dinoroseobacter shibae has optimised numerous adaptations to its habitat in its evolution. Besides its metabolic diversity, D. shibae can generate additional energy from light via aerobic anoxygenic photosynthesis. For the metabolic analysis of the control of this type of photosynthesis, a high-throughput method using a transposon mutant bank was first successfully established in this work. The transposon mutants were investigated with regard to their pigmentation, the spectrophotometric absorption of the pigments and the accumulation of the intermediate product of bacteriochlorophyll biosynthesis magnesium protoporphyrin-IX-monomethyl ester. Besides classical genes of photosynthesis, mostly organised in the photosynthetic gene cluster, mutants were found in genes of the associated stress response, such as light stress, salt stress, ROS, energy production and associated control. Furthermore, the light qualities and quantities used by D. shibae were analysed. It was found that blue light has a positive effect on growth and light-controlled electron transport. It was shown that most genes for the photosynthetic apparatus, bacteriochlorophyll and carotenoid biosynthesis, as well as their associated regulators and stress proteins are controlled by blue light. Energy metabolism and quorum sensing genes are co-regulated. The regulation of photosynthesis by blue light was also investigated. For this purpose, the transcriptomes of the regulators PpsR and PpaA, as well as the potential blue light receptor Dshi_1135 and the wild type were examined. This now allowed a detailed insight into how these three regulators control the previously resolved light regulation of gene expression in a light-dependent, yet cooperative manner. In the final part of this work, bacteriochlorophyll production was investigated at the single cell level. This revealed the vesicular organisation of bacteriochlorophyll at the intracellular membrane. In summary, this work contributes to the fundamental understanding of light-driven processes and their regulation in the marine model bacterium D. shibae.