Qualifizierungskonzepte und Qualitätsaspekte bei kapillarelektrophoretischen Proteinbestimmungen

Die pharmazeutische Industrie, Forschungseinrichtungen und Behörden fordern von Verfahren, die Einsatz in der Analytik von Arzneistoffen und Arzneimitteln finden, die Produktion von hochwertigen und zuverlässigen Daten. Zur Zeit ist die HPLC die Standardmethode für Gehalts- und Reinheitsprüfungen nach den Arzneibüchern Europas und der USA, allerdings hat sich seit der Einführung der automatisierten Kapillarelektrophorese Anfang der 1990er Jahre die Technik weiterentwickelt. Mit der steigenden Anzahl an Zulassungen für gentechnisch hergestellte Wirkstoffe werden Techniken wie die Kapillarelektrophorese benötigt, die komplexe Mischungen und Proteine analysieren können. In dieser Arbeit werden Konzepte und Methoden vorgestellt, die zeigen, dass die Kapillarelektrophorese die Anforderungen von Laboren der pharmazeutischen Industrie und der Lebenswissenschaften erfüllen kann. Der erste Teil beschäftigt sich mit dem Einsatz eines berührungsfreien IR-Thermometers, um die bei Analysen entstehende Temperatur an der Oberfläche der Kapillaren zu erfassen. Eine konstante Temperatur ist eine Voraussetzung für die Reproduzierbarkeit von Analyseergebnissen. Deswegen wurden die Daten für eine Bewertung von verschiedenen Kapillarelektrophorese-Systemen genutzt. Im zweiten Teil wird ein durchgängiges Konzept für die Qualifizierung von Kapillarelektrophoresen nach den Anforderungen des US-amerikanischen Arzneibuches vorgestellt. Dafür werden Parameter definiert, Methoden entwickelt und Akzeptanzkriterien festgelegt. Der dritte Teil zeigt am Beispiel der Proteomforschung, wie die in der Kapillarelektrophorese genutzte isoelektrische Fokussierung für die Analytik von komplexen Mischungen optimiert werden kann und welche Faktoren berücksichtigt werden müssen. Im letzten Teil wird erläutert, wie die Reinheitsprüfung von Proteinen und monoklonalen Antikörpern mit der Kapillarelektrophorese durchgeführt werden kann. Hieraus ergibt sich eine alternative Methode zur Gelelektrophorese, die zusätzlich nach Optimierung auch die Quantifizierung von Proteinen ermöglicht.