Mobility Shift Affinitätskapillarelektrophorese : Eine schnelle und präzise Methode zur Überprüfung von Liganden-Einflüssen auf Proteine

Interaktionen von Proteinen und verschiedenen Liganden können mit der Mobility Shift Affinitätskapillarelektrophorese untersucht werden. Hierbei werden in verschiedenen Messungen Änderungen der Proteinmobilität durch einen Liganden in Abhängigkeit der Ligandenkonzentration untersucht. Das Trennprinzip der Mobility Shift Affinitätskapillarelektrophorese beruht auf der Kapillarzonenelektrophorese, so dass sich hierdurch einige Vor- und Nachteile dieser Methode ergeben. Wichtigster Vorteil verglichen mit anderen Methoden wie der isothermen Titrationskalorimetrie ist, dass auch verunreinigte oder nicht aufgereinigte Proben verwendet werden können. Die Mobilitätsunterschiede der untersuchten Proteine durch Ligandeninteraktion waren zum Teil nur gering ausgeprägt. Zur Auswertung dieser Interaktionen wurde eine Berechnung von Konfidenzintervallen herangezogen, um bei den teilweise geringen Mobilitätsänderungen auf eine signifikante Interaktion zu prüfen. Die meisten getesteten Interaktionen mit den Proteinen Rinderserumalbumin (BSA), beta-Lactoglobulin, Myoglobin und Ovalbumin zeigten bei dem verwendeten pH-Wert von 7,4 einen signifikanten Einfluss auf die Proteinmobilität. Die als Liganden eingesetzten Substanzen lagen bei dem pH-Wert ionisch vor. Der Einfluss auf die Proteinmobilität deutet vor allem bei den Metallionen-Interaktionen und den kationisch vorliegenden Arzneistoffen auf einen zusätzlichen Einfluss der umgebenden Lösung hin, da sich die Mobilität in eine unerwartete Richtung änderte und folglich keine einfache Protein-Ligand-Interaktion vorliegen kann. Des Weiteren wurde der Einfluss von Arginin und Guanidinhydrochlorid in Abhängigkeit der Harnstoffkonzentration untersucht. Hierbei zeigten die getesteten Proteine BSA und beta-Lactoglobulin keine direkt vergleichbare Mobilitätsänderung. Außerdem wurde der Einfluss von Phosphorylierungen eines Peptidsegements der extrazellulär signal-regulierten Kinase 1 (ERK1) auf Metallionen-Interaktionen untersucht.