Wirtszellinfektion durch Salmonella Typhimurium  : Charakterisierung von neuen Genen mit Virulenzfaktorpotential

Um zum Verständnis der Wirtszellinfektionsverläufe von Salmonella Typhimurium beizutragen, befasst sich diese Arbeit mit der Identifizierung und Charakterisierung neuer potentieller Virulenzgene dieses bedeutenden zoonotischen Infektionserregers. Im ersten Teil wurde dazu ein für Legionella etabliertes Amöben-Screening-Modell genutzt. Hierbei bilden avirulente Legionellen eine charakteristische Koloniemorphologie aus. Analog wurden Tn5-mutagenisierte Salmonella Klonbänke auf unterschiedliche Sensitivität gegenüber Amöben im agar-basierten Screen untersucht. Im Genom der isolierten putativ avirulenten Salmonellen wurden die Transposoninsertionsorte bestimmt. Hierbei konnten die Tn5-Lokalisationen in bekannten sowie in möglichen neuen Virulenz-assoziierten Genen mit potentieller metabolischer, Chaperon-, Transport- und hypothetischer Funktion bestimmt werden. Die Testung der letztgenannten Mutanten auf ihre quantitative Infektionsfähigkeit in phagozytierenden und nicht-phagozytierenden Säuger-Zelllinien zeigte jedoch keine essentielle Rolle der identifizierten Gene. Möglicherweise sind die identifizierten Gene wichtig für die Salmonellen-Amöben-Interaktion was zukünftig im Amöbeninfektionsmodell untersucht werden sollte. Im zweiten Teil wurde mittels Genomsequenzanalysen gezeigt das Salmonella Typhimurium zwei Patatin-ähnliche Proteine besitzt. Diese als YchK und YjjU annotierten Proteine wurden charakterisiert und hinsichtlich ihrer potentiellen Funktion als Virulenzfaktoren untersucht. Mit rekombinant exprimierten affinitätschromatografisch gereinigtem YchK und YjjU wurde erstmals Phospholipase A Aktivität mit Substratspezifität beider Proteine vor allem gegenüber Phosphatidylglyzerol als auch gegenüber Phosphatidylcholin nachgewiesen. In vitro Infektionsexperimenten mit ychK-, yjjU-Einzel- und Doppel-Deletionsmutanten zeigten eine Entbehrlichkeit beider Patatin-ähnlichen Proteine. Es steht noch aus zu prüfen, ob diese Gene eine Rolle bei in vivo Infektionen spielen.