Humane Antikörper und ImmunRNasen zur Behandlung von CD30⁺ Lymphomen

Die Wirkung tumorspezifischer Antikörper gegen maligne Lymphome kann durch die Fusion mit RNasen verstärkt werden. Nach der spezifischen Bindung solcher ImmunRNasen an ein internalisierendes Antigen wie CD30 auf Tumorzellen, können die RNasen intrazellulär zytotoxisch wirken. CD30 ist auf vielen Lymphomzellen überexprimiert, während es nur auf wenigen gesunden menschlichen Zellen vorkommt. Ziel dieser Arbeit war die Untersuchung humaner Antikörper und ImmunRNasen zur Behandlung von CD30+ Lymphomen und der Vergleich der acht enzymatisch aktiven RNasen 1-8 der humanen RNasen A Superfamilie als Effektordomänen. Zunächst erfolgte die Analyse der RNasen 1-8. Da die Produktion der freien RNasen nur mit geringen Ausbeuten möglich war, wurden Fusionsproteine aus dem humanen IgG1-Fc-Teil und den RNasen in Säugerzellen produziert. Dies war für alle RNasen erfolgreich, aber nur die RNasen 1, 4, 5 und 7 ließen sich anschließend durch Spaltung mit einer sequenz-spezifischen Protease separieren. Diese RNasen wurden hinsichtlich ihrer enzymatischen Aktivität und deren Inhibition durch den humanen RNase-Inhibitor (RI) analysiert. Für die spezifische Tumorbindung wurden vier neue, aus einer humanen naiven Antikörper-genbibliothek isolierte CD30-spezifische Antikörper als scFv-Fragmente sowie scFv-Fc Antikörper produziert. Der Antikörper SH313-B5 wies eine hohe Affinität für CD30 und die stärkste spezifische Bindung an CD30 auf. Er wurde daher als neue Zellbindedomäne für die ImmunRNasen ausgewählt. Die humanen RNasen 1-8 wurden mit dem scFv-Fc Antikörper SH313-B5 über verschiedene Peptidlinker fusioniert. Neben einem flexiblen Linker wurden intrazellulär spaltbare Adapter untersucht, die eine verbesserte Translokation in das Zytoplasma und eine Freisetzung der RNase vom Antikörper ermöglichen sollten. Die ImmunRNasen wurden in Säugerzellen produziert und wiesen die erwarteten ribonukleolytischen Aktivitäten auf, deren Hemmung durch den RI variierte. Sie banden spezifisch an CD30+ Lymphomzellen und wurden in die Zellen aufgenommen. Der Antikörper SH313-B5-hFc bewirkte allein bereits eine starke Proliferationsinhibition der CD30+ Lymphomzellen, die durch die Fusion bestimmter RNasen verstärkt wurde. Der Einsatz der RNase3 bewirkte den stärksten Effekt mit einem IC50-Wert von 1 nM.