Der Einfluss von Raver1 auf „polypyrimidine tract-binding protein“- vermittelte Spleißprozesse

Auf Grund der Primärsequenz von drei RNA-Bindungsmotiven (RRMs) wurde das Protein Raver1 der Familie der hnRNPs zugeordnet, obwohl für Raver1 bisher keine direkte Interaktion mit RNA-Molekülen nachgewiesen werden konnte. Über Assoziation mit dem spezifischen Spleißfaktor PTB könnte Raver1 jedoch in die Prozessierung von RNA eingebunden sein und hier als Co-Repressor von PTB wirken, in dem Raver1 die repressive Wirkung von PTB auf alternativ inkorporierte Exons verstärkt. In der vorliegenden Arbeit wurde zunächst durch biochemische Analysen erstmals nachgewiesen, dass die RRMs von Raver1 prinzipiell in der Lage sind, an RNA zu binden. Weshalb das Gesamtprotein dennoch keine Wechselwirkung mit RNA in vitro zeigt, bleibt weiterhin zu klären. Die RNA-Interaktion von Raver1 erfolgt indirekt über den Raver-Liganden PTB, und es konnte die Bildung entsprechender trimerer Komplexe in vitro für Raver1 gezeigt werden. Für die direkte Bindung an PTB ist im Raver1 Protein im Wesentlichen ein einzelnes Bindungsmotiv mit der Aminosäuresequenz SLLGxxP entscheidend. Mutationen in diesem Motiv beeinträchtigen die PTB-vermittelte Rekrutierung des Raver1 Proteins in so genannte „perinucleolar compartments“ negativ. Durch vergleichende Analysen von Spleißmustern verschiedener PTB-Zielgene in Raver1-defizienten Mäusen und Wildtyp-Tieren wurde erstmals gezeigt, dass eine Modulation der Raver1-Expression auch in vivo einen Einfluss auf PTB-vermittelte Spleißprozesse hat. Untersuchungen an sechs PTB-Zielgenen mittels quantitativer „real-time“-PCR zeigten tatsächlich Verschiebungen in den Verhältnissen der alternativen Isoformen der Gene α Tropomyosin, c-src und FGF-Rezeptor2, die durch weiterführende Untersuchungen an den humanen Zelllinien HeLa und HEK bestätigt wurden. Diese Daten implizieren eine Beteiligung von Raver1 an alternativen Spleißprozessen, wobei der Verlust des Raver1-Proteins jedoch nicht eine universell co-repressive Wirkung auf die Zielgene des Spleißfaktors PTB ausübt.