Generierung rekombinanter Antikoerper gegen das Venezuelanische Pferdeenzephalitis-Virus

Das Venezuelanische Pferdeenzephalitis-Virus (VEEV) gehoert zu der Gattung Alphaviren. Bisher sind nur wenige monoklonale, hochaffine Antikoerper gegen diese Viren fuer die schnelle Diagnostik und Therapie verfuegbar. Ziel dieser Arbeit war die Generierung humaner rekombinanter Antikoerperfragmente gegen VEEV aus universellen Antikoerpergenbibliotheken zur verbesserten Detektion. Mittels der Phagen-Display-Technologie wurden erstmals virusspezifische Antikoerperfragmente durch Selektionen mit kompletten VEEV-Partikeln isoliert. Durch Optimierung der Selektionsstrategien konnten zwoelf VEEV-spezifische scFv-Klone aus zwei naiven Antikoerpergenbibliotheken isoliert werden. Zur Charakterisierung wurden scFv-praesentierende, filamentoese M13-Phagen dieser Klone produziert und zur Detektion verschiedener Viruspraeparationen eingesetzt. Die scFv-praesentierenden Phagen erkannten, eingesetzt als Detektionsantikoerper, verschiedene VEEV-Staemme, jedoch keine anderen Alphaviren. Der vielseitige und hochsensitive Einsatz von scFv-praesentierenden Phagen zur Virusdetektion wurde in dieser Arbeit demonstriert. Mittels Immunfaerbungen wurde gezeigt, dass strukturelle Epitope von den scFv-praesentierenden Phagen erkannt werden. Diese Strukturen konnten im Lysat mittels ELISA und auf der Zelloberflaeche VEEV-infizierter Zellen mittels Immunhistochemie spezifisch nachgewiesen werden. Zur Optimierung der Erkennungseigenschaften von VEEV wurde ein Kettenaustausch der variablen Domaene der leichten Antikoerperkette des generierten humanen Antikoerperfragments MK220-IG12 mittels Phagen-Display durchgefuehrt. Die generierten humanen Antikoerperfragmente koennten die schnelle Identifikation und Detektion von VEEV verbessern, sowie potentiell zur Therapie von VEEV-Infektionen eingesetzt werden.