Untersuchung verschiedener Einflüsse auf die Proteinadsorption an Primärpackmitteln

Das Ziel der vorliegenden Arbeit war die Untersuchung von Mechanismen, die zu einem Akti-vitätsverlust von Proteinlösungen bei deren Lagerung führen. Hierbei sollte insbesondere der Einfluss der Oberflächeneigenschaften verschiedener Primärpackmittel (PPM) sowie verschie-dener Zusätze charakterisiert werden. Als Modellprotein wurde hauptsächlich Lysozym einge-setzt. Mit Hilfe der Bradford-Methode wurde die gelöste Proteinmenge und mit dem Circular-dichroismus dessen Konformation bestimmt. Ferner wurde die Funktionalität des Proteins durch Bestimmung der enzymatischen Aktivität überprüft. Die Materialien der verwendeten PPM waren Typ I-Glas, Type I plus® Glas bzw. der Kunststoff Topas®. Die verwendeten Be-hältnisse waren z.T. zusätzlich silikonisiert. Da sich bei Lagerung in Vials der verschiedenen PPM kaum messbare Effekte ergaben, wurden Glasperlen und Topas®-Granulat mit definier-ter Oberfläche zu den Proteinlösungen gegeben, um das Oberflächen-Volumen-Verhältnis zu vergrößern. Generell wurde bei Glaskontakt eine reversible Adsorption des Lysozyms mit Denaturierung, bei Topas® eine irreversible Adsorption festgestellt. Dabei konnte gezeigt werden, dass sich eine irreversible Bindung von Proteinen an die PPM-Oberfläche bei höher konzentrierten Lö-sungen als günstiger erweist als eine reversible, wenn diese mit einer Denaturierung verbun-den ist. Zusätzlich wurden Untersuchungen mit rekombinantem Mistellektin in PPM-Behältnissen durchgeführt, in Type I plus® Glas wurde die höchste Konzentrationsabnahme sowie der stärkste Aktivitätsverlust verzeichnet, in Topas®-Behältnissen zeigten sich nur geringe struk-turelle Veränderungen des Proteins. Da jedes Protein in Abhängigkeit des Mediums ein unterschiedliches Verhalten erwarten lässt, ist keine allgemein gültige Aussage hinsichtlich der PPM-Protein-Wechselwirkung zu treffen. Die Untersuchungsstrategie sollte mit der Kombination geeigneter Methoden eine Differenzierung zwischen Adsorptionsphänomenen und anderen Instabilitäten erlauben.