Regulation des Serotoninrezeptor-3B-Gens : Gewebespezifische Transkription und funktionelle Analyse genetischer Polymorphismen

Der -100/-102 AAG Deletionspolymorphismus (rs3831455) im 5’-Bereich des HTR3B-Gens wurde signifikant mit erhöhtem akutem Erbrechen nach emetogener Zytostatikatherapie korreliert. Die funktionelle Bedeutung dieses Polymorphismus wurde in dieser Arbeit untersucht. Dafür wurden die Transkriptionsstartpunkte des HTR3B-Gens durch rapid amplification of mRNA ends (RACE), qRT-PCR und funktionellen Promotoranalysen definiert. Außerdem wurde der funktionelle Einfluss der Deletionsvariante auf die Genexpression von HTR3B mittels Luziferase-Reportergen-Analysen und electrophoretic-mobility-shift-Versuchen (EMSA) aufgeklärt. Die RACE und qRT-PCR-Analysen zeigten, dass im Gehirn gewebespezifisch ein anderer Transkriptionsstartpunktbereich verwendet wird als im Dünn- und Dickdarm. Der Bereich in dem der Transkriptionsstartbereich des Gehirns liegt, zeigte eine Promotoraktivität in Ratten-PC-12-Zellen, humanen LAN-1- und HEK293-Zellen. Der Transkriptionsstartbereich in dem die Deletionsvariante und Transkriptionstartpunkte des Darms liegen, zeigte signifikante Promotoraktivität in HEK293-Zellen. Die Deletionsvariante selbst zeigte keinen Einfluss auf die Reportergen-Expression. Auch die 3-fach hintereinander klonierte polymorphe Region zeigte keinen Effekt der Variante auf die Promotoraktivität in HEK293-, CaCo2- und PC-12-Zellen. Die EMSA-Versuche wiesen auf eine vom Polymorphismus abhängige Proteinbindung hin. Es konnte jedoch keine Sequenzspezifität für die Bindung nachgewiesen werden. Die -100/-102 AAG Deletionsvariante liegt im nicht transkribierten Promotorbereich des HTR3B-Gens, zeigt jedoch keinen direkten Einfluss auf die Promotoraktivität. Die Variante liegt in einer Region mit eng gekoppelt vererbten Polymorphismen, was möglicherweise die Korrelation mit Zytostatika-induziertem Erbrechen erklärt. Die in dieser Arbeit erstmals beschriebenen Transkripte im Gehirn lassen die Existenz von zwei neuen Proteinisoformen der B-Untereinheit des 5-HT3-Rezeptors vermuten.