Funktionelle Genomanalyse von sekretorischen Proteinen und den Wirtszell-Pathogen-Interaktionen des human-pathogenen Erregers Listeria monocytogenes

In dieser Arbeit wurden zwei für das Humanpathogen L. monocytogenes wichtige Subproteome sowie die Wirtszellantwort auf Invasion dieses Pathogens mit Methoden der Funktionellen Genomanalyse untersucht. Mittels LC-MS/MS gelang erstmals, die kovalent-gebundenen Zellwandproteine von L. monocytogenes zu untersuchen und 6 LPXTG-Proteine wurden identifiziert. Weiterhin konnte gezeigt werden, dass diese für die Pathogenität von Listeria monocytogenes wichtige Proteinklasse über das Enzym Sortase A an das Peptidoglycan verknüpft wird. Durch 2D-Gelelektrophorese und LC-MS/MS wurden 105 sekretorische Proteine identifiziert, darunter alle primären Virulenzfaktoren. Durch einen Vergleich mit einer prfA-Deletionsmutante konnte die PrfA-abhängige Expression der primären Virulenzfaktoren bestätigt werden und 13 weitere putativ PrfA-regulierte Proteine identifiziert werden. Durch einen Vergleich der Überstandsproteine der apathogenen Art L. innocua mit L. monocytogenes wurden neben den 8 primären Virulenzfaktoren 8 weitere Proteine identifiziert, die ebenfalls keine orthologen Gene in der apathogenen Art L. innocua besitzen. Bei Proteom- und ersten Transkriptionsuntersuchungen von mit L. monocytogenes infizierten HeLa-Zellen wurden mehrere Hinweise gefunden, dass während der listeriellen Invasion anti-apoptotische Signalwege in den Wirtszellen induziert sein könnten. Weiterhin konnte gezeigt werden, dass das Mikrotubuli-destabilisierende Protein Stathmin durch Infektion mit Listerien spezifisch phosphoryliert wird. Durch die Präsentation von rekombinantem InlB und des natürlichen Liganden von Met, HGF, konnte bestätigt werden, dass die Aktivierung von Met dafür verantwortlich ist.