Membranproteomanalyse des fakultativ intrazellulären Erregers Listeria monocytogenes

Membranproteine sind an wichtigen funktionellen Prozessen im Lebens- und im Infektionszyklus des fakultativ intrazellulären Erregers Listeria monocytogenes beteiligt. Um das schwer zugängliche Membransubproteom des grampositiven Bakteriums zu analysieren, wurde zunächst eine Methode zur spezifischen Anreicherung der Membranproteine entwickelt. Durch die Verwendung verschiedener Trennverfahren war es möglich, die Hauptproteinkomponenten der listeriellen Membran zu identifizieren und zu analysieren. Eine Gruppe der membranassoziierten Proteine, die Lipoproteine, wurde im Detail untersucht. Durch die Inhibierung der Lipidmodifizierung mittels der Konstruktion einer Prälipoprotein-Diacylglyceryl-Transferase (Lgt)-Deletionsmutante konnten zum ersten Mal 27 Lipoproteine eines grampositiven Bakteriums parallel identifiziert und validiert werden. Bei Infektionsanalysen mit der lgt-Deletionsmutante zeigte sich, dass den Lipoproteinen generell eine wichtige Rolle bei der intrazellulären Vermehrung der Listerien zukommt. Um Membranproteine und speziell Lipoproteine zu identifizieren, die unter der Kontrolle des zentralen Virulenzregulators PrfA stehen, wurden vergleichende Expressionsanalysen mit unterschiedlich PrfA-exprimierenden Stämmen durchgeführt. Dabei konnte u.a. für eine Komponente des Opp- Transportsystems, das als eines der dominantesten Transportsysteme der listeriellen Membran identifiziert werden konnte, eine PrfA-abhängige Regulation nachgewiesen werden.