Production of di-D-Fructofuranose 1,2´:2,3´ Dianhydride (DFAIII) using Recombinant Inulase II

Rekombinante Inulase II, die zur Biokonversion von Inulin zu DFAIII eingesetzt wird, wird intrazellulär in zwei gentechnisch veränderten Escherichia coli Stämmen akkumuliert. Fermentationsexperimente wurden in Bioreaktoren bis zu 20 L Reaktorvolumen durchgeführt, um hohe volumetrische Aktivitäten zu erzielen. Dabei wurden batch und fed-batch Strategien zur Limitierung des Kohlenstoffgehalts in der Kultur angewendet. Verschiedene Medien wurden zu diesem Zweck eingesetzt, die Hefeextrakt, Glycerin, Mineralstoffe und Vitamine in unterschiedlicher Zusammensetzung enthielten. Zur Isolierung des rekombinanten Proteins wurden verschiedene Methoden des Zellaufschlusses ausgetestet und die Aufschlußparameter variiert. Desweiteren wurde die Immobilisierung der rekombinanten Proteine an schwach-basischen Anionentauschern untersucht und die Halbwertszeit immobilisierter Inulase ermittelt. Der Einfluß von pH-Wert und Temperatur auf die DFAIII-Bildung wurde quantifiziert sowie die Michaelis-Menten-Parameter der rekombinanten Inulase II bestimmt. Abschließend wurden die löslichen und immobilisierten Enzyme charakterisiert und mit bekannten Inulasen verglichen.