Charakterisierung der Interaktion zwischen dem Strukturprotein Filamin und der Proteinkinase C alpha

Filamin A (FLNa) ist ein Strukturprotein der Zell-Matrix- Adhesionen und dient zusätzlich als Gerüstprotein zur intrazellulären Lokalisierung verschiedener signalübertragender Proteine. Die Proteinkinase C (PKC) ist eine Serin/Threonin Kinase mit Einfluss auf die Organisation des kortikalen Aktinzytoskeletts. Eine Interaktion von PKC mit FLN wurde postuliert, Details dieser Interaktion und deren Bedeutung für die Adhesions-abhängige Signalübertragung wurden bis heute nicht ermittelt. Zu Beginn dieser Arbeit wurden Yeast-two-hybrid- Analysen mit PKC als Köderprotein durchgeführt und FLN als direkter Bindungspartner der PKC nachgewiesen. Diese Interaktion ließ sich durch Ko-Immunpräzipitationsversuche unter Verwendung transfizierter HeLa-Zellen bestätigen. Anhand seriell verkürzter FLNa-Fragmente konnten zwei Bindungsregionen eingegrenzt werden. Diese Regionen zeigten in in vitro Bindungsversuchen eine Ca++- und Phospholipid-abhängige Wechselwirkung mit der regulatorischen Domäne der PKC. Die Phosphorylierung von FLN erwies sich als Isoform spezifisch, die C-Termini von Filamin A und C ließen sich in vitro durch PKC alpha phosphorylieren, der von FLNb dagegen nicht. Eine PKC-abhängige Phosphorylierung von FLN konnte auch in vivo nachgewiesen werden. Die erzielten Ergebnisse deuten auf eine Wechselwirkung von FLN und PKC in der zellulären Signalübertragung hin.