Identifizierung und Charakterisierung von Oberflächenproteinen des Gram-positiven Bakteriums Listeria monocytogenes

Schaumburg, Jessica

doi:10.24355/dbbs.084-200511080100-547

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Identifizierung und Charakterisierung von Oberflächenproteinen des Gram-positiven Bakteriums Listeria monocytogenes

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Im Infektionszyklus des fakultativ intrazellulären Gram-negativen Bakteriums Listeria monocytogenes spielen Oberflächenproteine eine wichtige Rolle bei der Adhäsion und Invasion. Zur Anreicherung der Zellwand-assoziierten Proteine wurden zwei neue Methoden etabliert: die serielle Extraktion und die endolytische Protoplastierung. Die generierten Zellwandfraktionen wurden durch Proteomtechniken kartiert und charakterisiert. Die Auftrennung der Proteingemische erfolgte durch ein- oder zweidimensionale Gelelektrophorese, die Identifizierung durch N-terminale Sequenzierung und massenspektrometrische Analysen. Außerdem wurde nach neuen Virulenzfaktoren gesucht, die unter Kontrolle des zentralen Virulenzregulators PrfA stehen. Hierfür wurden differentielle Expressionsanalysen des Zellwandproteoms in verschiedenen PrfA-Mutanten durchgeführt. Ein neuer putativ PrfA-regulierter Virulenzfaktor wurde biochemisch und infektionsbiologisch genauer charakterisiert.

In the infection cycle of the fakultative intracellular Gram-positive pathogene Listeria monocytogenes surface proteins play an important role in adhesion and invasion. For enrichment of cell wall proteins two new methods were established: the serial extraction and the endolytic protoplast formation. The generated cell wall fractions were mapped and characterised by proteome methods. The separation of the protein mixtures was performed by one- and two-dimensional gel electrophoresis and the identification by N-terminal sequencing and mass spectrometric analysis. Additionally, screeening for new virulence factors, that are under the conrol of the central virulence regulator PrfA, was done. Therefore the differential expression was analysised in the cell wall proteome of diverse PrfA mutants. One new putative Prfa-regulated protein was biochemically and infection biologically investigated in more detail.