Untersuchungen zur Eignung viraler Vollängenklone zur Expression von Nukleinsäuresequenzen mit möglichem antiviralem Potential in Pflanzen

Im Rahmen der Dissertation wurde die Eignung pflanzenviraler Vollängenklone zur Expression von Fremdsequenzen in Pflanzen untersucht. Ausgehend von cDNA-Klonen verschiedener Pflanzenviren wurde ein Vollängenklon bestimmt, der sich als Grundlage für die Etablierung eines Expressionssystems eignete (-> pPVX P2A AscI). Der auf dem Potexvirus Potato virus X (PVX) basierende Klon wurde darauf zur Fremdgen-expression in zwei verschiedenen Untersuchungsschwerpunkten genutzt. In einem ersten Ansatz wurden die Grundlagen für ein Testsystem zur Bestimmung des antiviralen Potentials von Nukleinsäuresequenzen entwickelt. Verschiedene Teilbereiche des PVX-Genoms wurden über pPVX P2A AscI als zusätzliche Sequenzen exprimiert und ihr Einfluß auf Vermehrung und Ausbreitung des exprimierenden Virus untersucht. Durch Überexpression des ganzlängigen Transportproteins P12 sowie durch Expression bestimmter Teilbereiche des Transportproteins P8 konnte eine hemmende Wirkung gegenüber PVX erreicht werden. In einem zweiten Ansatz wurde die Eignung des auf pPVX P2A AscI basierenden Expressionssystems zur Funktionsanalyse von Proteinen untersucht. Als Beispiel diente hier die Untersuchung der Partikelbildung durch die Hüllproteine des Tobacco rattle virus, des Potato virus Y und des Tobacco etch virus. Durch Expression der verschieden verkürzten und veränderten Hüllproteine dieser Viren über pPVX P2A AscI konnten spezifische Aminosäuren bzw. Sequenzbereiche innerhalb der Hüllprotein-sequenzen bestimmt werden, die essentiell für die Bildung virusähnlicher Partikel sind.