Untersuchungen zur Aufklärung des Prä-mRNA Spleißvorgangs in der Spalthefe Schizosaccharomyces pombe : Genetische und biochemische Charakterisierung der Interaktionen des prp4 Gens

Die Prp4p Proteinkinase von S.pombe ist direkt am Prä-mRNA Spleißvorgang beteiligt. Die Suche nach Interaktionspartnern der Kinase ergab die genetische Interaktion von Prp4p mit den Spleißfaktoren Cdc5p, Prp5p, Prp1p und Prp10p. Ebenfalls wurden zwei extragene Suppressoren spp41 und spp42 und ein High-Copy-Suppressor ubp21 der Prp4p identifiziert. Spp42p ist ein konservierter Spleißfaktor, der wichtige Funktionen am aktiven Zentrum des Spleißosoms erfüllt. Hingegen ist Ubp21p ein Deubiquitinierungsenzym und gehört nicht zu der Gruppe der Spleißfaktoren. Alle Spleißfaktoren, die mit Prp4p genetisch interagieren, sind an unterschiedlichen Prozessen des Spleißvorgangs beteiligt. Die Interaktion von Prp4p mit Prp1p wurde in der Arbeitsgruppe ausführlich untersucht. Es zeigte sich, daß Prp1p ein physiologisches Substrat der Prp4p Kinase ist. Möglicherweise kontrolliert die Prp4p-Kinaseaktivität durch Phosphorylierung von Prp1p die Bildung eines aktiven Spleißosoms. Die Mutationsanalyse der stark konservierten Sequenz ALKHP in Subdomäne XI der Kinase ergab, daß strukturelle Merkmale dieser Sequenz für die Kinasefunktion essentiell sind. ubp21 wurde als High-Copy-Suppressor einer Mutation des ALKHP-Motivs isoliert. ubp21 kodiert für ein Deubiquitinierungsenzym der Ubp-Familie (ubiquitin-specific processing protease). Die Ergebnisse lassen den Schluß zu, daß die Deubiquitinierungsaktivität von Ubp21p das Gleichgewichtsniveau von Prp4p reguliert.