Untersuchungen zur Temperaturstabilität von 4070A MLV unter Berücksichtigung der Virus/Zell Interaktionen

Im Rahmen dieser Arbeit wurde die Temperaturstabilität von 4070A Maus Leukämie Virus Vektoren untersucht, daß häufig für gentherapeutische Applikationen eingesetzt wird. Es sollte geklärt werden, welchen Einfluß die Produktionszellinie (NIH3T3, BHK-A, BHK21B, TE671) und die Produktionstemperatur (32°C oder 37°C) auf die Temperaturstabilität und damit Lagerungsfähigkeit der gebildeten retroviralen Vektoren hat. Es konnte gezeigt werden, daß beides die Temperaturstabilität der Viren entscheidend beeinflußt. So reduziert die Produktion bei 32°C die Stabilität der Viren um bis zu 66 Mit Hilfe von Microarray-Genexpressionsanalysen und biochemischen Analyseverfahren konnte nachgewiesen werden, daß ein erhöhter Cholesteringehalt in der viralen Membran die Ursache für die verringerte Halbwertszeit ist. Neben des Einflusses auf die Stabilität der 4070A MLV Vektoren konnte gezeigt werden, daß Cholesterin in Form cholesterinreicher Mikrodomänen auch eine Rolle im Lebenszyklus dieser Viren spielt. Die Ergebnisse dieser Arbeit geben erstmals einen Hinweis darauf, daß der virale Eintritt in die Zelle, der Zusammenbau und die Freisetzung in Rafts und/oder Caveolae erfolgt. In weiteren Genexpressionsanalysen wurde der Einfluß der Virusproduktion selbst auf die Produktionszellinie untersucht. Es wurde deutlich, daß die Virusproduktion zu komplexen Änderungen der zellulären Genexpressionsmuster führt. 17 aller regulierten Gene waren Gene des Cytoskeletts.