Entwicklung regulierbarer retro- und adenoviraler Vektoren für die Gentherapie

Die Möglichkeit, die Expression von Genen zu regulieren, ist sowohl in der Forschung als auch in der Gentherapie ein wünschenswertes Ziel. Jedoch unterliegt die Regulation der Limitation, dass alle regulierbaren Expressionssysteme aus zwei Komponenten bestehen, dem Transaktivatorprotein (tTA) und dem tTA-abhängigen Promotor, die in die Zielzellen transferiert und adequat exprimiert werden müssen. In der vorliegenden Arbeit wurden verschiedene autoregulative Expressionskassetten basierend auf dem tet-regulierten System entwickelt. Diese Kassetten wurden so konstruiert, dass sie alle Regulationskomponenten beinhalten und so in einem Schritt transferiert werden können (Single- Step-Systeme). Durch die autoregulative Anordnung des tTA's bleibt seine Expression auf die Phase der Geninduktion beschränkt. Toxische Nebenwirkungen werden so minimiert. Diese Kassetten wurden über Elektrotransformation sowie über retro- und adenovirale Infektion in die Zielzellen eingebracht und das jeweilige Expressions- und Regulationspotential ermittelt. Im Gegensatz zur unidirektionalen Expressionseinheit, boten die autoregulativen bidirektionalen Expressionssysteme nach jedem für die Gentherapie relevanten Transfer hohe und stabile Regulationskapazität des interessierenden Gens. Durch die Konstruktion chimärer retro-/adenoviraler Vektoren wurden Viren generiert, deren Charakteristika eine Kombination der positiven retro- und adenoviralen Eigenschaften darstellen. So war es möglich die effiziente Transduktion der Adenoviren mit der stabilen Intergration der Retroviren zu kombinieren. Dieses chimäre System könnte sich daher zu einem relevanten System in der Gentherapie entwickeln.