Embryonale Expressionsanalyse und genomische Charakterisierung des NRF-Gens

In dieser Arbeit wurde NRF, ein Repressor der NF-kappaB Aktivität, in der Maus analysiert. Dafür wurde das murine NRF-Gen isoliert und charakterisiert. Das embryonale Expressionsmuster wurde bestimmt, sowie die genomische Organisation und Lokalisierung festgestellt. Der Effekt des Fehlens von NRF wurde in Zellkultur untersucht. Zur Herstellung einer Null-Mutation wurde ein Zielvektor konstruiert und mutierte ES-Zellen hergestellt. Murine NRF cDNA wurde mit Hilfe des humanen NRF-Gens identifiziert. Diese cDNA diente zur Erkennung der genomischen DNA die das NRF-Gen enthält und zur Bestimmung des embryonalen Expressionsmusters durch 'whole-mount-in-situ-Hybridisierung'. Die Expression von NRF wurde in ES-Zellen und in Embryonen ab Tag 7,5 nachgewiesen. Sie konnte in der Embryogenese vorwiegend im Hirn, den Hinterwurzelganglien und den Extremitäten identifiziert werden. Dabei tritt als erstes (ab Tag10,5) Expression in den Hinterwurzelganglien auf. Die NRF Expression im Hirn konnte ebenso wie Expression in den Extremitäten ab Tag 11,5 nachgewiesen werden. In den Extremitäten erstreckt sich NRF-Expression um die Zonen der beginnenden Knorpelkondensation und in den Zehenzwischenräumen. Damit wurde NRF-Genexpression in Bereichen die vorwiegend Nervenzellen enthalten gefunden aber ebenso in Bereichen in denen in den Extremitäten Apoptose stattfindet. Die Derepression des Interferon-beta Promotors durch Expression von NRF-antisense RNA führt zur Produktion von Interferon und gleichzeitig zu einer erhöhten Sterberate von Zellen in Kultur. Die genomische Charakterisierung ergab eine große Homologie von 90 in der Proteinsequenz, ebenfalls 90 Homologie in der Sequenz der 3'UTRs und 78 Homologie der 5'UTRs. NRF wurde auf dem X-Chromosom kartiert und liegt dort in der A4 Region. Genauere Aussagen über die Funktion von NRF können aus einer konditionalen Null-Mutation gewonnen werden die in dieser Arbeit vorbereitet wurde.