Nachweis biologisch aktiver Wachstumsfaktoren mit Hilfe von Rezeptorproteinen

Die biotechnologische Herstellung pharmazeutisch wirksamer Proteine gewinnt zunehmend an Bedeutung. Von Interesse sind dabei Wachstumsfaktoren, die sich direkt oder indirekt als Humantherapeutika verwenden lassen. In der Forschung werden mit ihnen zelluläre Prozesse und damit verbundene Krankheiten untersucht. Von großem Interesse sind der angiogene Wachstumsfaktor VEGF und seine Rezeptoren KDR und FLT-1. Um rekombinant hergestelltes VEGF nutzen zu können, muß es in seiner biologisch aktiven Form vorliegen. Bisher werden aufwendige radioaktive Zellassays zur Überprüfung der Qualität genutzt. Da die Erkennung des Wachstumsfaktors über FLT-1 und KDR erfolgt, wurde in der vorliegenden Arbeit untersucht, ob sich die löslichen Rezeptorproteine (sFLT-1, sKDR) für den Nachweis von aktivem VEGF eignen. Untersuchungen zur Affinität zeigten, daß sich vor allem sFLT-1 für den Aufbau einer sensitiven Nachweismethode eignet. In Analogie zu bekannten Immunoassayformaten wurden verschiedene indirekte Rezeptorassays basierend auf Mikrotiterplatten konzipiert. So wurde eine kompetitive Nachweismethode mit einem VEGF-POD-Konjugat sowie unterschiedliche Rezeptorassays im Sandwichformat mit den entsprechenden Anti-VEGF-Antikörpern entwickelt. Neben diesen indirekten Formaten wurde auch das BIAcore-System als direkter Affinitätssensor verwendet. Mit Hilfe der entwickelten Rezeptorassays war die Quantifizierung von aktivem VEGF in verschiedenen Realproben problemlos möglich.