Zyxin und Fyb/SLAP : Charakterisierung bekannter und neuer Bindungspartner der EVH1-Domäne der Ena/VASP Proteinfamilie

Die Ena/VASP Proteinfamilie (VASP, Mena und Evl) ist an der Regulation der aktinvermittelten Bewegung tierischer Zellen beteiligt. Deren N-terminale Ena/VASP Homologie Domäne 1 (EVH1-Domäne) bindet an ein spezifisches prolinreiches Motiv in den Zytoskelettproteinen Zyxin, Vinculin und dem Listerienprotein ActA. In der vorgelegten Dissertation wurden bekannte und neue Bindungspartner der EVH1-Domäne der Ena/VASP Familie charakterisiert. Gegen das humane Zyxin, wurden monoklonale Antikörper hergestellt und eingehend charakterisiert. Um die Dynamik von Zyxin in vivo untersuchen zu können, wurde es als GFP-Fusionsprotein exprimiert und mit Rhodamin-markiertem Vinculin verglichen. Zyxin und Vinculin werden zum gleichen Zeitpunkt während der Bildung fokaler Kontakte eingebaut, aber während des Abbaus und der Bewegung ist Zyxin schnell nicht mehr zu detektieren, während Vinculin länger verbleibt. Mit polyklonalen Antikörpern, die gegen die Bindungsstelle der EVH1-Domäne im ActA Protein hergestellt wurden, konnte ein neuer Bindungspartner der EVH1-Domäne, Fyb/SLAP, kloniert werden. Fyb/SLAP kolokalisiert in Lamellipodien sich ausbreitender Thrombozyten mit F-Aktin und VASP und in aktivierten Jurkat T-Zellen an der Kontaktstelle mit anti-CD3 beschichteten Beads mit F-Aktin, WASP, Vav und Evl. In einem funktionalen Assay konnte gezeigt werden, daß die Proteine der Ena/VASP-Familie für die Aktinreorganisation, die während der T-Zell Aktivierung stattfindet, essentiell sind. WASP und Fyb/SLAP lassen sich in vivo als Komplex koimmunpräzipitieren. Dieser Komplex könnte die ActA analoge Funktion haben, die Aktinnukleation und -polymerisation zu induzieren und wäre damit das erste zelluläre Äquivalent zu ActA.