Die Spaltung cyanogener Diglucoside : Reinigung und Charakterisierung von Diglucosidasen aus Hevea brasiliensis

In cyanogenen Pflanzen können cyanogene Monoglucoside als Diglucoside transportiert werden. Im sink-Gewebe werden die diglucosidischen Transportmetaboliten enzymatisch von Diglucosidasen hydrolysiert. In dieser Arbeit wurden die Diglucosidasen, die an dieser Spaltung beteiligt sind, untersucht. Diese Hydrolyse kann entweder sequentiell oder im Zuge eines simultanen Abbaus erfolgen. Im ersten Fall wird durch die sequentielle Diglucosidase lediglich die terminale Glucose der cyanogenen Diglucoside abgespalten, im zweiten Fall findet eine vollständige Hydrolyse durch die simultane Diglucosidase unter Freisetzung von Gentiobiose statt. Die sequentielle Diglucosidase konnte aus Hevea brasiliensis bis zur Homogenität gereinigt werden. Die Aufreinigung einer simultanen Diglucosidase wurde aus den Wedeln des Farns Davallia bullata durchgeführt. Hevea brasiliensis - Die sequentielle Diglucosidase besitzt eine hohe Affinität zur pflanzlichen Zellwand. Der Einsatz von Hochsalz-Bedingungen führt zu einer Ablösung des Enzyms von den Zellwandtrümmern. - Die Aktivität der sequentiellen Diglucosidase in Blättern ist stark vom Blattstadium abhängig. - Die sequentielle Diglucosidase aus Blättern wurde über selektive Extraktion, Ammoniumsulfatfällung, Gelfiltration, Kationenaustauscherchromatographie und präparative native kationische Gelelektrophorese bis zur Homogenität gereinigt. Zur enzymologischen Charakterisierung der Diglucosidase wurde die pH-Abhängigkeit, die optimale Inkubationstemperatur und das Substratspektrum ermittelt. Die Km- und Vmax-Werte für die cyanogenen Diglucoside Amygdalin, Linustatin und Neolinustatin sowie für das artifizielle Substrat p-Nitrophenyl-ß-Glucosid wurden bestimmt. - Die sequentielle Diglucosidase wird durch die typischen ß-Glucosidase-Hemmstoffe stark inhibiert. - Das Molekulargewicht der nativen Form beträgt 365 kD, die Größe der Untereinheiten 67, 59 und 57 kD. Die sequentielle Diglucosidase ist ein Glycoprotein.