Stabilisierte und in ihrer Selektivität modifizierte Proteasen - Immobilisierung durch Copolymerisation von Enzymen

Die als VIP-Technik bezeichnete Methode stellt ein Verfahren zur Aufrechterhaltung imprinteter Proteinkonformationen dar. Die Technik beinhaltet die Weiterentwicklung einer kovalenten Zwei-Schritt-Immobilisierungsmethode, bei der Enzyme zunächst mit copolymerisierbaren Doppelbindungen enthaltenden Gruppen derivatisiert werden. Eine anschließende Copolymerisation mit einem Crosslinker überführt die Enzymderivate in Immobilisate. Die erzielbare Stabilitätsverbesserung wurde an Hand der enzymatischen Glycosylierung von Chloramphenicol mit der ß-Glucosidase aus der Mandel aufgezeigt. Die Induzierung einer Akzeptanz gegenüber D-konfigurierte Substrate wurde am Beispiel alpha-Chymotrypsin und Subtilisin Carlsberg durch eine Fällung mit 1-Propanol in Gegenwart ihres kompetitiven Inhibitors N-Acetyl-D-tryptophan realisiert. Die resultierenden Enzympräparationen waren in der Lage, N-Acetyl-D-tryptophanethylester aus N-Acetyl-D-tryptophan und Ethanol in Cyclohexan zu synthetisieren. Eine vor dem Imprinting durchgeführte Derivatisierung der Enzyme mit Itaconsäureanhydrid ermöglichte die Copolymerisation der in Cyclohexan suspendierten Enzympartikel. Die imprintete D-Akzeptanz wurde dadurch so fixiert, daß im wässrigen Medium der D-konfigurierte Ester enzymatisch hydrolysiert werden konnte. Die hergestellten VIPs (vernetzte imprintete Proteine) wurden detailliert charakterisiert.